上海博訊醫療生物儀器股份有限公司調查發現近年來,已經成為生物制藥有效途徑之一的是將生物活性成分從天然產物中提取出來。挑選天然藥物最主要的原料一直以植物為主,但用于藥用 的植物中活性物質在其組織中含量一般很低,如果 為了自身利益,人們一直過度使用野生藥用植物資 源,該物種就會瀕危直至滅絕,這樣就會使環境遭到破壞,還會破壞生物多樣性。為了解決環境資源問題,近年來,研究了野生藥用植物的熱點,重點是藥用植物的內生真菌。研究表明,內生真菌的祖先可能是植物 病原體,長期存在于植物組織中,與寄主植物“共同進化”,因此在此過程中,形成的代謝物可能與宿主植物相同或相似。許多物質都有多種活性。內生真菌,從不同植物中分離純化出來,其種類數目不同,少的有幾種到十幾種,多的有幾百種。上海博訊生物儀器股份有限公司通過對蒲公英內生真菌的培養、純化和鑒定,為將藥用微生物資源更好地開發奠定堅實基礎。
1儀器
電子分析天平,北京賽多利斯儀器公司產品;超凈工作臺,蘇州止痙凈化設備有限公司產品;生化恒溫培養箱;上海博訊醫療生物儀器股份有限公司,高壓蒸汽滅菌鍋,上海博訊醫療生物儀器股份有限公司;電熱鼓風干燥箱,北京科威永興儀器有限公司產品。
2 制作培養基
稱取土豆200g,經清潔、去皮后切成塊,用蒸餾水煮沸,紗布折疊成8層,然后過濾,加入20g葡萄糖,并加入20g瓊脂?;瘖y用1L量筒至1000mL和分配到3個錐形瓶中,然后用高壓蒸汽鍋滅菌。除菌后,將介質的溫度降低至約55℃,并加入青霉素鈉的80×104U和100×104U硫酸鏈霉素去除內生 細菌。倒30個平板,放置于超凈臺內,等待接種。
3 內生真菌的培養
選擇沒有害蟲和傷口的新鮮蒲公英并用無菌水沖洗。上海博訊醫療生物儀器股份有限公司在超潔凈平臺上,采用組織切割法采集植物的莖、葉和根,用手術刀將蒲公英的莖和根切成0.5cm×0.5cm×0.5cm,0.5cm×0.5cm的小塊。將切割的材料置于乙醇中2,4min,并比較消毒時間。將混合物用蒸餾水洗滌3次,然后將該材料置于浸有汞 的溶液中浸泡2min,用蒸餾水沖洗3次,并置于無菌濾紙上。吸去水后,將其分別置于含有硫酸鏈 霉素的培養基上,在各板上放置4片,密封膜,在30℃的培養箱中培養3~7d。 另在一個平板內倒入無菌水,與上述平板一起放 入培養箱中,觀察是否有細菌長出,作為無菌參照。
4 結論
作為微生物資源的植物內生微生物,較普遍地存在于植物中。上海博訊拿其與通常的微生物相比,植物內生微生物對植物表現出一定的親和力。植物又是內生微 生物賴以生存的物質基礎,植物生產極大地關系到社會的繁榮和發展。因此,植物內生微生物研究、資源的積累及其操作技術和利用技術的研究有著重要意義。