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內生真菌( endophytic fungi) 是指生活在植物體 內的一類真菌，在寄主中度過全部或近乎全部生活周 期而不使寄主表現任何癥狀，可以經對植物組織內直 接擴增微生物 DNA 的方式來證明其在內部的真實存。內生真菌廣泛存在于植物的健康組織內，是植 物微生態系統的重要組成部分。在長期的進化過程 中，一些共存的內生真菌與其宿主植物相互建立了特 殊的關系，這種關系可以顯著影響植物中有效成分的 形成，從而影響藥用植物的質量和數量。
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毛脈酸模 Ｒumex gmelini Turcz． 種子取自黑龍江 中醫藥大學藥用植物園，經黑龍江中醫藥大學王振 月教授鑒定。毛脈酸模內生真菌，由課題組前期分 離得到菌株 J-G( Plectosphaerella Sp． ) 。 MS 培養基( 不含瓊脂和蔗糖，青島賓得生物技 術有限公司) ; 瓊脂( 北京奧博星生物技術有限責任公 司) ; 無水乙醇( 天津天力化學試劑有限公司) ; 白藜 蘆 醇 苷 對 照 品 ( 批 號: MUSH-1616062102，純 度 99． 78% ) 、白藜蘆醇對照品( 批號: MUSH-12032106， 純度99． 50% ) 均購自成都曼思特生物科技有限公司; 大黃酚-8-O-葡萄糖苷對照品( 批號: CS1611TZ01，純 度 98%，上海澄紹生物科技有限公司) ; 酸模素對照 品( 批號: AB161206054，純度 98%，成都埃法生物科 技有 限 公 司) ; 蘆薈大黃素對照品( 批 號: 110795- 201609，純度98． 1% ) 、大黃酸對照品( 批號: 110757- 201607，純度99． 3% ) 、大黃素對照品( 批號: 110756- 200110，純度99． 5% ) 、大黃酚對照品( 批號: 110796- 201017，純 度99． 6% ) 、大黃素甲醚對照品( 批 號: 110758-201013，純度99． 8% ) 均購自中國食品藥品檢 定研究院。
將冷藏于試管中的 毛脈酸模內生真菌 J-G 取出，用 75% 乙醇對試管表 面消毒后，置于經紫外滅菌 30 min 的超凈工作臺 中，用酒精燈灼燒接菌環的上半部分，待接菌環冷卻 后，使試管傾斜 45°，將接菌環伸入試管中，挑取部 分菌絲接入經高壓滅菌的新鮮的 PDA 培養基，將接 過菌的新鮮培養基放入培養箱，28℃暗培養 1 周。真菌 J-G 接入經高壓滅菌的液態 PDB 培養基中，在震蕩培養箱中 28℃無光條件以 120 r·min － 1 的轉速 震蕩培養。培養 7 d 后，從搖瓶中收獲真菌，用抽濾 機將菌絲濾出，并用蒸餾水洗滌數次。將每 10 g 新 鮮真菌生物量重新懸浮于 100 ml 蒸餾水中，通過勻 漿機強烈機械攪拌后，高壓滅菌。滅菌的真菌勻漿 作為實驗中的誘導劑。將飽滿的毛脈酸 模種子用 120 目砂紙摩擦后，放入蒸餾水中浸泡 24 h，然后將種子取出，用 75% 的酒精浸泡 2 min，用無 菌水沖洗 3 次，再用 2% NaClO 浸泡 10 min，然后無 菌水沖洗 5次。將處理過的種子接種于無菌的 MS 固體培養基( MS + 蔗糖 + 瓊脂) 上，每個培養皿 中均勻接入 10 粒種子，用封口膜將培養皿封住，放 置于光照培養箱中在培養溫度( 晝/夜) 25 ℃ /18 ℃、光照周期 14 /10 h、光照強度 3 000 Lx 的條件下 培養，至種苗長出 3 片真葉。以上種子消毒及接到 MS 培養基的過程均需在超凈工作臺中進行。選取 54 瓶長 勢一致的毛脈酸模無菌苗，分 18 組，每組 3 瓶，在潔 凈工作臺中，用無菌注射器向 27 瓶含有毛脈酸模無 菌苗的錐形瓶中注入制備好的內生真菌誘導子 5 ml，其余 27 瓶作為空白對照，培養條件與放置于光 照培養箱中在培養溫度( 晝/夜) 25 ℃ /18 ℃、光照 周期 14 /10 h、光照強度 3 000 Lx 的條件下培養，每 5 d 更換一次培養基，分別在培養 5，10 ，15 d 的時 候收獲試驗組( 各 3 組) 和空白對照組( 各 3 組) 的 植物根部。
本研究利用內生真菌 J-G 誘導子與毛脈酸模幼 苗共培養，在不同培養時間檢測實驗組幼苗相對于 空白對照組的含量變化，結果發現白藜蘆醇和白藜 蘆醇苷等二苯乙烯類成分含量顯著提高，酸模素和 蒽醌類成分含量在誘導過程中呈現先增高后降低的趨勢。由此發現誘導子短時間( 5 d) 作用對毛脈酸 模中次生代謝產物的積累具有顯著的促進作用。誘 導子是內生真菌菌絲滅活制得的，化學本質是無毒 力作用的寡糖、蛋白質等，因此不會對植株的生長產 生抑制作用，可能由于內生真菌的誘導子特異性地 誘導了特定基因的表達，觸發植物細胞間復雜的反 應，導致次生代謝產物的合成和積累。
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