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急性白血?。╝cute leukemia，AL）是常見的 血液病，在血液系統惡性疾病中占首位，其準確 分型對患者的治療和預后具有重大的指導意義。 基于形態學（包括細胞化學染色）的 FAB 分型法 是傳統的分型方法。隨著世界衛生組織（WHO） 對白血病分型的提出、流式細胞術的發展，免疫 分型在臨床的應用越發廣泛。目前，MICM 分型已 得到國內外學者的高度認可，但仍有很多基層醫 院、甚至很大一部分三級醫院受試劑、儀器等的 限制無法普及，尤其細胞遺傳學及分子生物學分 型，在很多醫院應用受阻。
材料和方法
病例一般資料 2016 年 4 月 - 2018 年 6 月在本院確診的初診急性 白血病患者 119 例。所有患者均符合白血病的診斷標準，其中 AML-M0（M0）1 例，AML-M1（M1） 4 例，AML-M2（M2）37 例，AML-M3（M3）25 例， AML-M4（M4）5 例，AML-M5（M5）10 例，AML 未分型 3 例，ALL 33 例，MAL 1 例。其中男性 65 例， 女性 54 例，中位年齡 46（3-89）歲。
儀器與試劑
瑞氏 - 姬姆薩染色液試劑盒購自珠海貝索生物技 術有限公司，過氧化物酶（POX）染色試劑、過碘酸雪夫反應（PAS）染色試劑、醋酸萘酚酯酶（NAE） 染色試劑購自廣東西隴化工股份有限公司，由本 實驗室配制。FACSCanto II 型流式細胞儀、所有 破膜劑、溶血素及單克隆抗體，包括：HLA-DR、 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、 CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、 CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、 CD41a、CD42b、CD56、CD58、CD61、CD64、 CD71、CD79a、CD105、CD117、CD123、GlyA、 CD45，均購自美國 Becton Dickinson 公司。細胞染 色體培養液、秋水仙胺購自天津瑞愛金生物科技 有限公司，ABI 7500 型 PCR 儀購自美國 Life 公司， Vilber 凝膠分析系統購自法國 Lourmat 公司，DY600 型中壓電泳儀購自廣東省汕頭市金砂廣播儀器 廠，博迅SSW-420-2S 型電熱恒溫水浴箱購自上海博迅 實業有限公司醫療設備廠，淋巴細胞分離液購自 華美生物工程公司，白血病相關融合基因檢測試 劑盒購自上海源奇生物醫藥科技有限公司。
細胞形態學檢查
選取骨髓小粒多、涂片好的骨髓涂片進行瑞氏 - 姬姆薩染色，油鏡下在細胞單個散在、分布均勻 的區域分類計數 200 個有核細胞，同時進行細胞 化學染色，包括過氧化物酶（POX）染色、過碘酸 - 雪夫反應（PAS）染色、醋酸萘酚酯酶 + 氟化鈉抑 制實驗（NAE+NaF），計數陽性率并觀察酶型。 操作主要參考《全國臨床檢驗操作規程第三版》， 按 FAB 標準分型。
免疫學分型
采集患者肝素抗凝骨髓液 1-2 ml，24 h 內用流 式細胞儀進行測定，按 CD45/SSC 設門分出骨髓 細胞中的幼稚細胞群和成熟細胞群；根據需要 選擇相應系列的免疫熒光標記的單克隆抗體， 進行免疫表型檢測并分析其抗原表達情況，結 果判定以膜抗原＞ 20%，CD34 和胞質內抗原＞ 10% 為陽性，根據歐洲白血病免疫分類協作組（European Collaborative Group on Immunotaxonomy of Loubernix，EGIL）積分標準確定類型。
染色體核型分析
采集患者肝素抗凝骨髓液 2-5 ml，按 2×106 /ml 細 胞密度接種于細胞染色體培養液中，過夜培養， 終止培養前 1 h 加入終濃度為 0.05 ul/ml 的秋水仙 胺，再離心收獲細胞，用甲醇和冰醋酸按 3∶1 配 置成的固定液固定 3 次，滴片，R 顯帶法進行核 型分析，每份標本盡可能分析至少 20 個中期相細 胞。核型描述參照《人類細胞遺傳學國際命名體 制（ISCN2013）》。
分子生物學檢測
采集患者 2-3 ml 抗凝骨髓液，加入等體積生理鹽 水稀釋，用淋巴細胞分離液分離單個核細胞，再 裂解單個核細胞，提取總 RNA，測定 RNA 濃度。 取 20 μl 反應體系，以試劑盒提供的逆轉錄酶、 特異引物和模板，在 37℃逆轉錄反應 1 h 得到 cDNA，以 cDNA 為模板進行多重巢式 PCR 反應， 最后取反應產物在 1.5% 瓊脂糖凝膠中電泳，觀察 分析結果。 統計學分析 采用 SPSS 17.0 軟件分析，計數資料比較采用卡方 檢驗，P ＜ 0.05 為差異有統計學意義。
結 果
119 例急性白血病中 M1 3 例，M2 27 例，M3 25 例，
M4 5 例，M5 13 例，AML 未分型 10 例，ALL 32 例，
AL 4 例。原始細胞及原始細胞等同細胞的形態和
細胞化學染色具有如下特征：①原始粒細胞：胞
體多數圓形或類圓形，胞漿量少、天藍色、繞于
核周，胞漿無顆?；蛞娂毿∈忍烨囝w粒，胞核圓
形或類圓形，居中或稍偏位，染色質細顆粒網狀、
均勻平坦，有淡藍色核仁 1- 數個。POX 染色陽性
率≥ 3%，呈弱陽性、陽性或較強陽性，陽性反應
物顆粒較粗大、聚集、濃縮。PAS 染色多
為弱陽性，陽性反應物表現為細顆粒彌散狀。非
特異性酯酶（NAE）染色呈陰性或弱陽性，陽性
反應物表現為彌散狀，不被 NaF 抑制。② M2b 細胞：
有二種類型，一種分化程度差，原始細胞胞核常
見凹陷，染色質細致，核仁常見，核凹陷處常見“黃
沙土樣”改變，或稱“朝陽紅”, 易見 1 或 2 根細長 Auer 小體。
討 論
急性白血病形態學分型是結合細胞形態學和細胞 化學染色特征進行分型，可對急性白血病進行亞 型診斷，迄今為止，仍是白血病診斷的基礎。 盧興國教授也提出，所有白血病診斷的起點是 基于外周血細胞形態學的檢驗，經檢查和評估得 到的信息具有重要的臨床意義和價值。本研究發 現，某些類型的急性白血病有其典型的形態學特 征，如M3、M4EO，單純靠形態學基本可以明確診斷， 這兩種類型白血病也可以單純靠細胞遺傳學或分 子生物學直接診斷，但后者檢測時間較長，且受 儀器、試劑等的限制無法廣泛普及；本次研究還 發現，單純形態學分型的診斷符合率達 76.5%，接 近單純免疫學分型的診斷符合率（79.8%），兩者 間的差異無統計學意義。
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