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0 引言
昆蟲穴蟻（Myrmeleon sp），其幼蟲俗稱蟻獅， 屬脈翅目昆蟲。具有化瘀通竅、利水通便、退瘡 祛痰等療效，可用于治療骨髓炎、中耳炎、脈管炎 等。我國對蟻嶺幼蟲的研究可追溯到明朝，李 時珍在1578年撰寫的《本草綱目》中就記載了蟻 獅可入藥，其后的很多醫書也闡述了蟻獅作為中 藥對治療疾病的功效（周漢輝等，2000），近年來 對蟻獅藥用價值的深度開發仍在繼續。目前治 療心血管病的藥物多為人工合成的西藥，大多具 有難以克服的缺點和不良副作用，而天然藥物常 具低毒性無副作用的優點。因此利用蟻獅研發 治療和預防心血管病的新藥，前景極為廣闊。
1 材料及方法
1.1 原料與試劑
蟻獅：購自野生活體金沙牛直銷店；磷酸二 氫鈉：天津市大茂化學試劑廠；磷酸氫二鈉：天津 市大茂化學試劑廠；硫酸銨：天津市福晨化學試 劑廠；三（羥甲基）氨基甲烷試劑：天津市大茂化 學試劑廠；鹽酸：西隴化工股份有限公司；氯化 鋇：上海山浦化工有限公司；乙二胺四乙酸二鈉 （EDTA）：天津市大茂化學試劑廠；氯化鈉：天津 市大茂化學試劑廠；聚乙二醇10000：天津市大茂 化學試劑廠；D34mm透析袋：上海源葉生物技術 有限公司；氯化鉀：天津市大茂化學試劑廠；氫氧 化鈉：西隴化工股份有限公司；瓊脂糖：GENE COMPANGY；碳酸氫鈉：天津市大茂化學試劑廠； 磷酸二氫鉀：天津市大茂化學試劑廠；考馬斯亮藍G-250：上海藍季科技發展有限公司；牛血清蛋 白：北京索萊寶科技有限公司；尿激酶：中國食品 藥品檢定研究所；牛凝血酶：中國食品藥品檢定 研究所；牛血清蛋白：北京索萊寶科技有限公司； 無水氯化鈣：天津市大茂化學試劑廠；硫酸銅：天 津市大茂化學試劑廠；氯化鎂：天津市大茂化學 試劑廠；硫酸錳：天津市大茂化學試劑廠；氯化 鋅：天津市大茂化學試劑廠；十二烷基硫酸鈉 （SDS）：天津市大茂化學試劑廠；乙二醇-雙-(2- 氨基乙醚)四乙酸（EGTA）：上海展云化工有限公 司；L-半胱氨酸酸鹽一水：天津市大茂化學試劑 廠；巰基乙醇（βME）：西隴化工股份有限公司；一 水合檸檬酸：天津市大茂化學試劑廠；甘氨酸：天 津市大茂化學試劑廠。
1.2 儀器與設備
JB-2型恒溫磁力攪拌器：上海雷磁新涇儀器 有限公司；AUY220電子分析天平：梅特勒-上海； 高速冷凍離心機：熱電（上海）科技儀器有限公 司；DHG-9076A型電熱型恒溫鼓風干燥箱：上海 精宏實驗設備有限公司；WFZ—UV-2000型紫外 可見分光光度計：尤尼柯（上海）儀器有限公司； 微量移液器：德國Eppendorf公司；博迅生化培養箱：上 海博迅實業有限公司。
2 實驗方法
2.1 粗蛋白的提取
將蟻獅從沙子里揀出，洗凈，瀝干，稱量，冰 凍致死；研磨后，加入適量預冷PBS（pH 7.4）浸沒 勻漿，4℃浸提24h。取浸提液，4℃，10000r/min條 件下離心15min，去沉淀，合并上清液。采用硫酸 銨鹽溶液飽和度的方法，對所得蟻獅粗提液進 行分段鹽析，得到0~35%、35%~70%、70%~100% 的目的蛋白，收集沉淀。將各鹽析段沉淀分裝入 預處理好的透析袋中，先用雙蒸水透析4h，再用 Tris-HCl 緩沖液（pH 7.4）透析，透析過程中多次更換緩沖液，直至緩沖液用氯化鋇溶液檢測不出 白色沉淀為止。透析后加入聚乙二醇進行濃縮， 濃縮后將透析袋中待測液取出，分裝后置 4℃保 存備用。
2.2 標準曲線的制定
打開超凈工作臺，紫外照射 0.5h 后，放入已 準備好的纖維蛋白凝膠平板等實驗耗材，用孔徑 為0.6cm的已滅菌槍頭的較大一端在板上打孔并 提前做好標記。按標記的順序每孔依次按表2加 入不同濃度的尿激酶溶液各20μL，并留一孔加入 PBS溶液20μL作為陰性對照，待加樣完成后，小 心平移將平板取出，用保鮮膜包好，于 37℃恒溫 培養箱中孵育20h左右。到時間后取出平板，每 板倒入考馬斯亮藍染液約10mL進行染色，10min 左右，然后先用蒸餾水多次沖洗平板至蒸餾水無 色后，換用洗脫液沖，至溶圈清晰可見即可。用 刻度尺測量溶圈的垂直直徑，每孔測量兩次，取 平均值，計算出實驗所得溶圈的面積。
2.3 纖溶活性的測定
采用纖維蛋白平板法測定提取的蛋白粗提 液是否有纖溶活性。 纖維平板的制作：取 0.6g 瓊脂糖于錐形瓶 中，加入 72mLPBS 緩沖液滅菌后冷卻至 50℃左 右，再加入3mL牛血纖維蛋白原、120μL凝血酶， 迅速搖勻并倒平板，將倒好的平板 4℃保存備 用。檢測時取出平板，用 200μL 槍頭打孔后加 樣，放入 37℃恒溫培養箱培養 24h，再進行染色、 脫色，如有纖溶活性，即可觀察到藍色平板上的 透明溶圈。
2.4 蛋白濃度的測定
蛋白濃度測定使用BCA蛋白定量法，以牛血 清白蛋白(BSA)作為標準參照物。 稀釋BCA標準品：與待測蛋白樣品相一致的 稀釋液按表1稀釋BCA標準品。
3 結論
采用硫酸銨分段鹽析法分離提取出蟻獅纖溶活性蛋白，通過纖維平板法檢測，發現 0%~35%、35%~70%、70%~100%三個段的蟻獅的 粗蛋白都具有與 UK 相媲美的纖溶活性，甚至高 于 UK。蟻獅粗蛋白經一系列理化性質研究，結 果表明，最適溫度為37℃，最適pH為6。
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