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近年來，惡性腫瘤的發病率和病死率均逐年上升， 癌癥已成為我國居民的第一位死亡原因，疾病負擔沉重 。目前，臨床上使用的抗腫瘤藥普遍存在治療窗窄、 藥品不良反應相對較大、采用沖擊療法易導致過量中毒 等問題。而研究發現，一些天然藥物能夠抑制腫瘤的 生長，對腫瘤的轉移和復發有一定的抑制效果，且對放 療、化療具有“增效減毒”的作用 ，具有較大的開發研究 價值。三脈菝葜（Smilax trinervula Miq.）為菝葜科菝葜 屬植物，主要分布于我國江西、浙江、福建等地，亦分布 于日本 。
1 材料
1.1 儀器
MK-Ⅱ型酶標儀、3111 型二氧化碳培養箱（美國 Thermo Scientific 公司）；TS100-F 型倒置顯微鏡（日本 Nikon 公司）；RE-5205 型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀 器廠）；DZF-6030B型真空干燥箱（上海一恒科學儀器有 限公司）；HHS-11-2型電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實業有限公司）；TDZ4A-WS型低速臺式離心機（長沙湘儀離心 機儀器有限公司）；SW-CJ-2F 型潔凈工作臺（蘇州安泰 空氣技術有限公司）；BS124S型萬分之一天平[奧多利斯科學儀器（北京）有限公司]。
1.2 藥品與試劑
三脈菝葜藥材于 2016 年 9 月份采自江西省宜豐縣 黃崗山墾殖場，由江西中醫藥大學黃慧蓮教授鑒定為百 合科植物三脈菝葜（S. trinervula Miq.）的根莖；DMEM 高糖培養基（美國 Hyclone 公司，批號：AAJ207791）；胎牛血清（浙江杭天生物科技股份有限公司，批號： 20170124）；MTT（批號：303HC510）、試驗用順鉑粉末 （批號：320B022，純度：≥98.5％）、胰蛋白酶-EDTA消化 液（批號：20170623）、青鏈霉素混合液（100×）（批號： 20170625）、二甲基亞砜（DMSO，批號：20180608）均購 自北京索萊寶公司；試驗用環磷酰胺粉末（上海阿拉丁 生化科技股份有限公司，批號：L1729054，純度：97％）； 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等試劑均購自國藥集團 化學試劑有限公司，均為分析純。
1.3 動物
健康SPF級KM小鼠，♂，體質量（20±2）g，90只， 由江西中醫藥大學動物實驗中心提供，實驗動物生產許 可證號：SCXK（贛）2018-0003。小鼠購入后，SPF級標準 飼養，飼養和實驗期間予以自由攝食和飲水，并觀察小 鼠飲食和毛發狀況。飼養和實驗期間的操作符合國家 科學技術部頒布的《實驗動物管理條例》。
1.4 細胞株
人肝癌細胞株HepG2、人肺癌細胞株A549、人乳腺 癌細胞株 MCF-7 和 MDA-MB-231、人宮頸癌細胞株 HeLa、人卵巢癌細胞株 HO-8910 以及小鼠肉瘤細胞株 S180均來源于中國科學院上海細胞生物研究所細胞庫。
2 方法
2.1 三脈菝葜醇提取物及其各極性部位萃取物的制備
稱取干燥的三脈菝葜根莖14 kg，切碎，用70％乙醇 加熱回流提取3次，每次1 h，過濾后合并濾液，減壓濃縮 至無醇味，得到三脈菝葜提取物總浸膏 740 g（得率： 5.286％）。取總浸膏675 g混懸于適量的蒸餾水中，依次 用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，減壓濃縮后分別 得到三脈菝葜醇提物各部位萃取物浸膏：石油醚部位萃 取部位 5.5 g（得率：0.043％）、乙酸乙酯部位萃取部位 65.9 g（得率：0.516％）、正丁醇萃取部位 123 g（得率： 0.963％）；并將余下的水液減壓濃縮，得到三脈菝葜醇提 物水層部位372.2 g（得率：2.915％）。
2.2 待測樣品溶液的制備
根據預試驗結果，分別稱取三脈菝葜醇提物浸膏 200 mg、醇提物石油醚萃取部位和醇提物乙酸乙酯萃取 部位浸膏各50 mg、醇提物正丁醇萃取部位浸膏100 mg 和水層部位浸膏 200 mg，置于 1 mL 不同量瓶中，用 DMSO溶解并定容至1 mL，得到不同質量濃度（均以浸膏量計）的母液：三脈菝葜醇提物為200 mg/mL、醇提物 石油醚萃取部位和醇提物乙酸乙酯萃取部位均為 50 mg/mL、醇提物正丁醇萃取部位為100 mg/mL、醇提物水 層部位為 200 mg/mL。取上述母液，用 0.22 μm 微孔過 濾器過濾后，置于4 ℃冰箱中保存，備用。臨用前，取適 量溶液用完全培養基（含1％青鏈霉素混合液和10％胎 牛血清的高糖DMEM培養基）稀釋到所需質量濃度。
2.3 細胞培養
從－80 ℃冰箱中取出各細胞株，將凍存管置于 37 ℃水浴鍋中水浴約1 min，完全解凍后，轉入含5 mL 完全培養基的離心管中，以1 000 r/min離心3 min，棄上 清液，加入6 mL完全培養基，置于37 ℃、含5％CO2培養 箱中培養，復蘇后24 h更換培養基，之后每2～3 d對細 胞進行一次傳代，細胞傳代2次以上可用于試驗。
3 結果
三脈菝葜醇提物及其不極性萃取部位對6種腫瘤細 胞的抑制作用均呈現明顯的量-效關系。其中以三脈菝 葜醇提物乙酸乙酯萃取部位對腫瘤細胞的增殖抑制作 用最強，對各腫瘤細胞的IC50在40～210 μg/mL之間，其 對 MCF-7 細胞的 IC50為 70.56 μg/mL，對 MDA-MB-231 細胞的 IC50為 83.58 μg/mL，對 HeLa 細胞的 IC50為 44.67 μg/mL，這提示三脈菝葜的抗腫瘤有效成分可能集中在 醇提物乙酸乙酯萃取部位。但與傳統的抗腫瘤藥物順 鉑相比，三脈菝葜醇提物及其各極性萃取部位對6種腫 瘤細胞的IC50均較高。
4 討論
采用 MTT 法，考察了三脈菝葜醇提物及其不極性萃取部位對人肝癌細胞株HepG2、人肺癌細胞株 A549、人乳腺癌細胞株 MCF-7、MDA-MB-231、人宮頸 癌細胞株HeLa和人卵巢癌細胞株HO-8910在內的共計 6種腫瘤細胞株的增殖抑制作用，初步篩選了三脈菝葜 醇提物的抗腫瘤活性部位。結果發現，三脈菝葜醇提物 乙酸乙酯萃取部位的細胞增殖抑制效果最強，呈現明顯 的量-效關系，并且三脈菝葜醇提物乙酸乙酯萃取部位 對人乳腺癌細胞 MCF-7（IC50 為 70.56 μg/mL）、MDAMB- 231（83.58 μg/mL）和人宮頸癌細胞 HeLa（44.67 μg/mL）的體外增殖表現出較好的抑制效果，這提示三 脈菝葜抗腫瘤活性成分可能集中在三脈菝葜乙酸乙酯 萃取部位。結合相關研究結果發現，三脈菝葜與菝葜科 其他屬植物的抗腫瘤活性部位相一致，但三脈菝葜醇提 物乙酸乙酯萃取部位對腫瘤細胞的抑制效果強于菝葜 科其他屬植物的乙酸乙酯萃取部位（IC50大多在 100～ 300 μg/mL 之間）。
