博迅隔水箱用于胞菌的分離鑒定

材料與方法

血瓊脂、ＲＳ瓊脂培養基均購自上 海生工生物科技有限公司；光學顯微鏡購自上海光 學儀器廠；隔水式恒溫培養箱購自上海博迅醫療生 物儀器股份有限公司；ＰＣＲ 擴 增 儀 購 自 德 國 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；電泳儀購自北京六一儀器廠；凝膠 成像儀購自 美 國 Ｋｏｄａｋ 公 司；ＡＴＢ 自 動 化 微 生 物 鑒定系統購自法國梅里埃公司。在無菌條件下，用７５％ 酒精對草龜體表消毒，并對草龜進行體表檢查。進 一步對草龜 解 剖，打 開 腹 板 后 觀 察 臟 器 病 變 情 況。 采取腹水、肝 組 織 病 料，分 別 接 種 于 血 瓊 脂、ＲＳ 瓊 脂培養基中，置３０ ℃恒溫培養箱培養１６～２４ｈ， 觀察單菌落生長情況。選取優勢菌落再次劃線接種 進行純化培養，然后做革蘭染色，待干后鏡檢。

結 果

以分離 菌 株 ＣＬＷ－１提 取 的 基 因 組 ＤＮＡ 作 為 ＰＣＲ模板進行擴增，結果所示，１６ＳｒＤＮＡ 擴增條帶 大小為１４０６ｂｐ，與 片 段 預 期 大 小 一 致。將 擴增出的 片 段 構 建 到 ｐＭＤ１８－Ｔ 載 體 上，由 上 海 生 工生物科技有限公司測序，將測序結果在 ＮＣＢＩ中進 行ＢＬＡＳＴ對比分析，結果顯示，分離菌株 ＣＬＷ－１在 遺傳進化樹中與維氏氣單胞菌為同一簇，且與維氏 氣單胞菌（ＫＰ１６１８７３．１）相似性為１００％。表 明分離菌株 ＣＬＷ－１為維氏氣單胞菌。藥敏試驗 結 果 表 明，分 離 菌 株 ＣＬＷ－１ 具 有 多 重耐 藥 性：分 離 菌 株 ＣＬＷ－１ 對 哌 拉 西 林、頭 孢 唑 林、恩諾沙星、頭孢哌酮、頭孢曲松、環丙沙星、氧氟 沙星、氯霉素、頭孢呋辛敏感，那么在臨床實踐中可 以結合這幾種藥物治療水生動物的維氏氣單胞菌 ??；對呋喃唑酮、苯唑西林、紅霉素、米諾環素、丁胺 卡那、慶大霉素、復方新諾明、多西環素、新霉素、卡 那霉素、頭孢氨芐、四環素中敏，在治療過程中輪換 聯合用藥，協助治療此菌的感染；對麥迪霉素、克林 霉素、萬古霉素、多 黏 菌 素 Ｂ、羧 芐 西 林、氨 芐 西 林、 頭孢拉定、諾氟沙星、青霉素耐藥。

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